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本制品包含5种多肽和3种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3.4kD～100kD。可以用来判断SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。

组分	规格
超低分子量蛋白Marker III(3.4～100kD)	50μL
说明书	1份

保存：-20℃，有效期1年。


第一次收到该产品，室温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底，根据需要适量分装成小管，-20℃贮存，每次取一小管使用；本制品为即用型，融化后既能使用，不能95℃加热处理。

一、制胶

• 配制分离胶
  
  • 按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(19:1)、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。
    
  • 加入10%APS和TEMED，立即混匀5～10秒，以使溶液充分混匀。
    
  • 在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3cm的水层，使凝胶表面保持平整。
    
  • 静置30～60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
    表一：一块0.75mm mini胶用量
    

    成分	分离胶	浓缩胶
    	18％T,5%C/6.0mL	5％T,3.3%C/2mL
    40% PAA(19:1)	2.7mL	/
    40% PAA (29:1)	/	0.25mL
    4×凝胶缓冲液	1.5mL	0.5mL
    乙二醇(电泳级)	1.8mL	/
    ddH2O	/	1.25mL
    10％APS	50～65μL	20μL
    TEMED	6μL	2μL

    
    注：如非必须，不要使用1.0mm和1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
• 配制浓缩胶
  去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
  
  • 按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(29:1)和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。
    
  • 加入10%过硫酸铵和TEMED，立即混匀5～10秒，以使溶液充分混匀。
    
  • 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
    
  • 静置30～60分钟装待凝胶聚合

二、电泳

• 取一管分装好的Marker样品，彻底融化，不要加热处理，充分混匀后备用。
  
• 电泳前，将10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液（货号：RFT061）用蒸馏水稀释成1×缓冲液备用。将电泳槽的内外槽加入1×缓冲液，轻柔拔出梳子，将Marker或蛋白样品[样品已经过2×Tricine上样缓冲液(货号：RFT154)处理]加入点样孔，根据表二条件进行电泳，至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2～3个小时。
  注：如果电泳时间过短，染色时，指示前沿容易遮挡小于5kd的小肽。
  表二：多肽电泳条件
  

  恒电压	150V
  起始电流	45～55mA
  结束电流	10～15mA
  电泳时间	2～3小时

三、染色
根据常规实验步骤，用配方5和6（表三）进行染色和观察。如果使用配方5进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择本公司的QuickLan蛋白染色液（货号：RFT053），该产品能在5分钟之内完成蛋白的染色，不至于小肽在染色和脱色中从凝胶中脱离，是常规染色液的理想替代品。
表三：小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制

• 40%PAA（29:1，配制浓缩胶）
  

  丙稀酰胺	38.67g
  甲叉双丙稀酰胺	1.33g
  用ddH2O溶解后定容至100mL，过滤后使用，4℃保存。

  
  
• 40% PAA（19:1，配制分离胶）
  

  丙稀酰胺	38g
  甲叉双丙稀酰胺	2g
  用ddH2O溶解后定容至100mL，过滤后使用，4℃保存。

  
  
• 4×凝胶缓冲液（配制凝胶用）
  

  Tris碱	182g
  ddH2O	300mL
  SDS	1.5g
  用HCl调pH值至8.45，用ddH2O定容至500mL，4℃保存。

  
  
• 10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液
  

  Tris碱	121.14g
  Tricine	179.2g
  SDS	10g
  用ddH2O溶解，定容至1000mL(不用调pH)，4℃保存。 注：使用前稀释成1×缓冲液使用

  
  
• 染色液
  

  冰醋酸	100mL
  甲醇	450mL
  考马斯亮蓝G-250	0.25g
  水	450mL

  
  
• 脱色液
  

  冰醋酸	100mL
  水	900mL

  
  
• 2×Tricine蛋白样品上样缓冲液（10mL）
  

  1M Tris-HCl,pH6.8	1mL
  甘油	2.4mL
  SDS	0.8g
  DTT	0.31g
  考马斯亮蓝G-250	2mg
  用灭菌ddH2O定容至10mL，混匀分装-20℃贮存备用。

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